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核酸電泳

沒有時(shí)間倒入自己的瓊脂糖凝膠,制作自己的緩沖液,等待一個(gè)多小時(shí)才能得到結(jié)果?你很幸運(yùn),因?yàn)楹怂犭娪久刻於甲兊迷絹?lái)越容易。使用預(yù)制凝膠,一體化套件,甚**自動(dòng)化,您可以完成一項(xiàng)耗時(shí),繁瑣的任務(wù),就像微波爐一袋爆米花一樣簡(jiǎn)單 - 并且比祖父在倒回自己的凝膠時(shí)更好雖然瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠電泳是可靠的,堅(jiān)固的技術(shù)已經(jīng)使用了幾十年,但仍然有一些令人驚訝的創(chuàng)新,通過在凝膠盒外思考。

Bio-Rad提供**廣泛的核酸電泳產(chǎn)品系列之一包括用于水平和垂直凝膠電泳的系統(tǒng),用于脈沖場(chǎng)電泳的CHEF系統(tǒng),核酸測(cè)序,用于突變分析的DCode,印跡系統(tǒng)以及全部選擇的試劑,染色劑和緩沖劑。他們用于常規(guī)核酸電泳的所有產(chǎn)品**近都經(jīng)過升級(jí)和優(yōu)化,以便更快,更方便。“我們盡量讓它變得無(wú)痛,”基因表達(dá)部門產(chǎn)品經(jīng)理Veronika Kortisova Descamps說(shuō)道。“研究人員不必花費(fèi)任何精力思考他們應(yīng)該將凝膠放入儀器內(nèi)的方式。即使修理也很容易:如果它們斷裂,我們的系統(tǒng)需要大約五秒鐘的時(shí)間來(lái)拆卸和更換電極。“

除了傳統(tǒng)的核酸電泳技術(shù),研究人員正在尋找下一波解決方案,這些解決方案不會(huì)占用工作日的大部分時(shí)間,或者消耗過多的樣品。為此,Bio-Rad還提供基于微流體的自動(dòng)電泳解決方案,用于使用Experion™自動(dòng)電泳系統(tǒng)進(jìn)行RNA和DNA分析(以及蛋白質(zhì))。根據(jù)待分離的生物分子,可提供不同的芯片,并且需要非常少的樣品用于分析。例如,RNA芯片可容納少**5 ng的RNA(Experion RNA StdSens分析試劑盒),為下游應(yīng)用(如RT-qPCR)保存了珍貴的樣品。qPCR的新指南稱為MIQE 1強(qiáng)調(diào)RNA質(zhì)量和完整性的重要性,正在通過科學(xué)界滲透。Experion系統(tǒng)可幫助研究人員在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)符合MIQE指南。2

“在考慮RNA質(zhì)量時(shí),許多人只關(guān)注純度。然而,物理完整性 - 無(wú)論分子是否降解 - 是后續(xù)實(shí)驗(yàn)成功的重要因素。Experion的RQI(RNA質(zhì)量指標(biāo))工具提供了一種標(biāo)準(zhǔn)化的RNA質(zhì)量測(cè)量方法,規(guī)模為1到10“,Bio-Rad實(shí)驗(yàn)室分離部門營(yíng)銷經(jīng)理Mary Grace Brubacher說(shuō)。

Lonza提供一整套核酸和蛋白質(zhì)電泳解決方案,包括瓊脂糖粉末,預(yù)制瓊脂糖凝膠,預(yù)制SDS和天然PAGE凝膠,標(biāo)準(zhǔn)品,染色劑和緩沖液。他們的產(chǎn)品專為滿足廣泛的應(yīng)用和需求而量身定制,從快速簡(jiǎn)單的閃光凝膠到支持技術(shù)先進(jìn)應(yīng)用(如測(cè)序和qPCR)的產(chǎn)品。

像Lonza的FlashGel®這樣的超快速凝膠系統(tǒng)是業(yè)內(nèi)**熱門的趨勢(shì)之一。其背后的想法是,在您進(jìn)行下一步之前,一個(gè)小的,快速的凝膠分析可以為您提供DNA或RNA的有用快照。FlashGel系統(tǒng)是一個(gè)手掌大小的組合電泳盒和transluminator單元。它使用含有預(yù)制,預(yù)染色凝膠??的預(yù)制盒式磁帶。凝膠以275伏特運(yùn)行,是標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖凝膠推薦的110伏特的兩倍多。“它運(yùn)行得如此之快,”Mary Riley說(shuō),“你可以逐字地觀察樂隊(duì)的遷移......對(duì)于大多數(shù)片段,你會(huì)在五分鐘或更短的時(shí)間內(nèi)看到樂隊(duì)的明顯分離。對(duì)于某些片段,它只需要兩分鐘。“Flash Gel的一個(gè)常用用途是快速分析PCR產(chǎn)物,看看反應(yīng)是否成功。另一個(gè),

近年來(lái),Lonza跟蹤了電泳客戶的增加,以支持下一代測(cè)序,qPCR和基因分型。瓊脂糖凝膠電泳是一種多功能的方法,幾乎??可以在每個(gè)實(shí)驗(yàn)室中顯示,而SeaKem,NuSieve和Metaphor等Lonza品牌已成為該行業(yè)的主要產(chǎn)品。“由于其**的純度,我們的瓊脂糖還用于一些有趣的非電泳應(yīng)用,例如制藥應(yīng)用的輸送機(jī)制,”Riley說(shuō)。

即使使用像瓊脂糖凝膠電泳一樣古老而熟悉的技術(shù),仍然可以提出一種完全改變范式的新想法。Faster Better Media(FBM)就是這種情況。該公司圍繞一個(gè)簡(jiǎn)單的想法組織 - 一個(gè)低導(dǎo)電緩沖液,讓您的凝膠在高電壓下運(yùn)行,因此您可以在凝膠上高分辨率分離DNA條帶,只需花費(fèi)一小部分時(shí)間來(lái)運(yùn)行常規(guī)凝膠凝膠。使用FBM的LB緩沖液,可以提高凝膠盒上的電壓,并在十五分鐘或更短的時(shí)間內(nèi)完成整個(gè)分析。

經(jīng)過這么多年的保姆凝膠和過熱的煩惱,許多科學(xué)家很難實(shí)現(xiàn)過渡。“我們收到一些有趣的電子郵件,人們說(shuō),'當(dāng)我以250伏的電壓運(yùn)行時(shí),我得到了很好的結(jié)果。我們的事情已經(jīng)達(dá)到了300,但我很擔(dān)心這么高。“ 我回信說(shuō),'去吧!' 并且他們很興奮,他們這樣做并且有效!“喬恩布羅迪博士說(shuō),他是'1 Faster Better Media的共同擁有者和共同**。

傳統(tǒng)運(yùn)行緩沖器中的熱量問題源自緩沖器的tris分量。Tris緩沖液具有高電導(dǎo)率,并產(chǎn)生高電流。高電流增加了緩沖器的熱量和電導(dǎo),這進(jìn)一步增加了電流。來(lái)自Faster Better Media的**發(fā)布的基于鋰的緩沖液電導(dǎo)率低,不會(huì)產(chǎn)生這種反饋回路。使用三硼酸鹽EDTA(TBE)或三乙酸乙酯EDTA(TAE)緩沖液進(jìn)行DNA和RNA電泳是基于傳統(tǒng),而非**佳效用。直到**近,它才受到質(zhì)疑。

核酸電泳是一種非常著名的常用技術(shù)。然而,因?yàn)槿藗冋谝孕碌姆绞绞褂煤怂幔缭趒PCR和下一代測(cè)序?qū)嶒?yàn)中,所以值得再看一下舊的瓊脂糖凝膠,看看你是否仍在充分利用你的設(shè)置,你的緩沖液,和你的污漬。

參考文獻(xiàn):

1 Bustin,SA等,“MIQE指南:發(fā)布定量實(shí)時(shí)PCR實(shí)驗(yàn)的**小信息”。Clin Chem,55,611-22,2009。

2 Taylor,S,et al。,“RT-qPCR發(fā)布符合MIQE指南的數(shù)據(jù)的實(shí)用方法”。Bio-Rad Bulletin#5859,2009。